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1. 介紹
牛奶中的黃曲霉毒素 M1 被認為是劇毒物質，國際癌癥機構將黃曲霉毒素M1列入一類致癌物清單中，歐盟規定其限量為0.05μg/kg。黃曲霉毒素M1可通過側向層析試紙條進行快速檢測，并通過 ELISA 進行定量，檢測時間至少為15分鐘和90分鐘。由于免疫層析技術中免疫化學的局限性，為實現歐盟限量中的高靈敏度造成了障礙。因此，ELISA 檢測方法仍然是黃曲霉毒素 M1 定量篩選最可靠的方法。
2. 研究目的
此研究的目的是對比一種創新的免疫層析檢測和 ELISA 方法對牛奶樣品中黃曲霉毒素M1的定量檢測能力。
3. 研究方法
指示型側向層析試紙條由高親和力單克隆抗體、結合膠體金、一條化學修飾的半抗原測試線和一條抗體對照線組成。抗黃曲霉毒素 M1 使用正在申請專利的O.H.C.M.I.T 技術生產（半抗原載體摩爾濃度優化型免疫原性技術）。在小鼠免疫接種和雜交瘤制備完成后，篩選克隆并使用蛋白 G 柱純化。基于這些特異性抗體，創建了對稱型黃曲霉毒素M1側向層析測試產品（Symmetric M1），這款競爭性免疫測定產品，僅需10分鐘即可完成檢測，且樣品無需前處理。黃曲霉毒素M1的濃度由量化系統 S-Flow 分析得出。S-Flow系統使用新型對稱量化技術，正在申請專利。掃描系統由 Lateral Logic有限公司提供。用于側向層析試紙條測定的所有樣品（產品信息：Symmetric M1黃曲霉毒素檢測試紙條，S2196，批號S2196006，由 Prognosis Biotech S.A.股份有限公司提供）同時使用 ELISA 試劑盒進行測定（產品信息：Bio-Shield M1 ES，B2096，批號B2096040，由Prognosis Biotech S.A. 股份有限公司提供）。
4. 研究結果
此研究中的 ELISA 試劑盒使用受控包被工藝，抗體具有穩定的結合活性和較高特異性的特點，具有低基質效應和較優的回收水平。在 2013-2017年多次奶或奶酪環測試（Ring Test）結果中，Z分數的平均值為-0.0087（圖1）。
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圖1: 2013-2017 年度奶或奶酪環測試中 Z 分數水平
在均質牛奶（CHM），牛奶原奶（CRM），山羊奶原奶（GRM）和綿羊奶原奶（SRM）四種奶樣品中添加五種不同水平濃度的 AFM1（12.5、25、37.5、50、75ppt）作檢測分析，結果發現每種奶樣品在 ELISA和側向層析檢測中的回收率平均值幾乎相同。具體來看，ELISA檢測的平均回收率分別為97.6%、98.4%、102.5%和100.7%，側向層析檢測分別為97.9%、97.5%、97.3%和 98.0%（圖2）。
圖2: ELISA和側向層析對不同樣品中添加不同濃度黃曲霉毒素M1檢測的回收率水平
以上結果通過檢測上述樣品中不同濃度的黃曲霉毒素 M1（表1）和參考物質（圖3）得到證實。2017年在AIA 環測試中（注 AIA:意大利育種協會，管理意大利所有肉產品和奶產品的生產）對乳制品中黃曲霉毒素M1檢測，Bio-Shield M1 ELISA試劑盒（61號）和Symmetric M1側向層析試紙條（98號）分別在99個參加者中排名第2（Z分數：0.04）和第5（Z分數：0.2）（表2）（圖4）。在5名側向層析試紙條參加者中，Symmetric M1 排名第1（圖5）。
圖3: ELISA 和側向層析檢測參考物質的回收率水平
表 1: 相對偏差(%) (ELISA結果(ppt)/側向層析結果(ppt)
表2: 2017年9月乳品中黃曲霉毒素M1 AIA 環測試結果RT M1 260917
圖4: 2017年9月乳品中黃曲霉毒素M1 AIA 環測試RT M1 260917 所有參加者 Z-分數結果
圖5: 2017年9月黃曲霉毒素M1 AIA環測試RT M1 260917中側向層析參加者 Z-分數
高親和力抗體和高級定量系統的結合有助于獲得較大范圍的標準曲線。根據掃描設備的結果，ELISA 和側向層析試紙條的曲線圖以及回收率水平幾乎相同。
5. 結論
??? 該創新的對稱型側向層析方法是檢測乳制品中黃曲霉毒素 M1快速定量檢測方法中最準確的工具，其結果可與定量 ELISA 結果相媲美。
2018年8月 Bio-Shield M1 ES試劑盒及Symmetric M1定量試紙條通過ILVO驗證（ILVO: Flanders research institute for agriculture, fisheries and food. Technology and Food Science unit, Belgium.比利時弗拉芒農業漁業和食品研究所，被譽為歐洲的AOAC）。
ILVO 研究報告
S-Flow 分析系統