GB 15979《一次性使用衛生用品衛生標準》發布于1996年，最新一版更新于2002年，隨著今年新型冠狀病毒疫情的侵襲，這個標準廣受關注，而標準里對于綠膿桿菌的檢測是很多檢驗人員關注和有所疑惑的。在這里，小王就這個標準里對綠膿桿菌檢測的相關要點和大家分享一下。

一、綠膿桿菌簡介

首先，我們先了解下綠膿桿菌。

綠膿桿菌，又稱銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginosa)，1882年由Gersard從傷口膿液中分離，是一種革蘭氏陰性、好氧、呈長棒形的細菌，因感染后膿汁和浸出液等病料呈綠色，故此得名。

該菌最適宜的生長溫度為30℃-37℃，42℃能生長，4℃不生長。大多數菌株能產生水溶性的綠膿菌素和熒光色素，可向培養基周圍擴散而呈現藍綠色，某些菌株也分泌一些暗紅色素（具體可參考GB 8538-2016中對于銅綠假單胞菌可疑菌落鑒定的相關內容）。?

綠膿桿菌的革蘭氏染色鏡檢照片

二、綠膿桿菌檢驗流程

接下來，我們來看一下GB 15979《一次性使用衛生用品衛生標準》中關于綠膿桿菌的檢驗流程：

第一步中，5mL樣液加入到50mL SCDLP培養液中，35℃±2℃培養18h-24h。由于綠膿桿菌是需氧菌，所以在培養液表面生長旺盛，會形成一層薄菌膜，培養液呈黃綠色或藍綠色。這點是很容易做到和看到的。

但第二步中，標準中描述：

其實，“挑取菌膜處的培養物劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂，培養后觀察其菌落周圍培養基略帶粉紅色”這一現象，很多檢驗人員都反饋看不到所謂的粉紅色。小王用樣品中分離的綠膿桿菌劃線了十六烷三甲基溴化銨瓊脂，平板現象如下：

從圖中可以看出，十六烷三甲基溴化銨瓊脂上的菌落周圍沒有出現粉紅色，鑒于GB 8538-2016飲用天然礦泉水檢測方法中對綠膿桿菌菌落形態的描述有藍綠色、紅褐色等多種顏色，小王認為，即便劃線后培養基沒有所謂的粉紅色，也依然要繼續進行后續的生化鑒定。因為多數研究表明，綠膿桿菌所產色素的顏色和培養基的成分相關。

三、綠膿菌素生化實驗

在后續的生化鑒定實驗中，小王認為操作上存在難度的，就是綠膿菌素實驗了。那咱們就先看下標準中是如何對此實驗進行描述的：

從標準中可以看出，加三氯甲烷后的操作只有充分振蕩，而實際操作中，直接振蕩的效果很差，即便是用接種環把上面的菌苔刮取后振蕩，效果也依舊不佳。請看下圖：

所以，各位小伙伴們在做此實驗時候，就可以借鑒小王的操作啦！

至于其他生化實驗，小王還是相信各位水平的，如果依然有不太明白的，那就聯系陸橋技術小王！隨時恭候您的提問。

參考文獻

1.韓青松, 簡永利, 涂宜強,等. 綠膿桿菌研究進展[J]. 畜牧與飼料科學, 2012(01):128-130.

2.GB 15979-2002?一次性使用衛生用品衛生標準[S].

3.GB 8538-2016?食品安全國家標準?飲用天然礦泉水檢驗方法[S].